Precauciones de seguridad importantes:
* Use equipo de protección personal apropiado (PPE): Esto incluye guantes, gafas de seguridad y una capa de laboratorio.
* Trabajar en un área bien ventilada: Algunos reactivos pueden liberar humos.
* Manejar los productos químicos con cuidado: Consulte las Hojas de datos de seguridad de materiales (MSD) para todos los productos químicos utilizados.
* Deseche los desechos químicos correctamente: Siga las pautas de su institución o municipio para la eliminación de desechos peligrosos.
* Considere alternativas: Compruebe si hay kits de prueba comerciales que son más fáciles y más seguros de usar.
Método:método de liberación de yodo
Este método se basa en la capacidad de BPO para oxidar los iones de yoduro (I-) al yodo (I2). El yodo liberado reacciona con almidón para formar un complejo de color azul, que se puede observar visualmente o cuantificarse espectrofotométricamente.
Materiales:
* Muestra de harina
* Éter dietílico o éter de petróleo (solvente para extracción BPO)
* Ácido acético glacial
* Solución de yoduro de potasio (KI) (por ejemplo, 10% p/v en agua destilada)
* Solución de almidón soluble (por ejemplo, 1% p/v en agua destilada, recién preparado)
* Agua destilada
* Vasos
* Embudo de separación
* Papel de filtro
* Espectrofotómetro (opcional, para análisis cuantitativo)
Procedimiento:
1. Extracción:
* Pese una cantidad conocida de harina (por ejemplo, 10 g) en un vaso de precipitados.
* Agregue una cantidad adecuada de éter dietílico o éter de petróleo (por ejemplo, 50 ml) a la harina. Este solvente disolverá el BPO.
* Revuelva la mezcla completamente durante unos 15-30 minutos para extraer el BPO.
* Filtre la mezcla a través del papel de filtro para eliminar las partículas de harina sólida. Recoja el filtrado.
* Evapore el solvente en una campana de humo, dejando el BPO extraído como un residuo. Use precaución al evaporar éteres, ya que son altamente inflamables. Un evaporador rotativo es ideal para esto, pero también se puede usar un calentamiento cuidadoso en una placa caliente a baja temperatura.
2. Reacción:
* Disolver el residuo en una pequeña cantidad de ácido acético glacial (por ejemplo, 5 ml).
* Agregue unas gotas de solución de yoduro de potasio (KI) (por ejemplo, 1 ml).
* Mezcle bien y permita que la mezcla se repite durante 5-10 minutos en la oscuridad.
3. Detección:
* Agregue unas gotas de solución de almidón recién preparada (por ejemplo, 1 ml).
* Observe el cambio de color de inmediato. Un color azul indica la presencia de BPO. La intensidad del color azul está relacionada con la cantidad de BPO presente.
4. Análisis cualitativo versus cuantitativo:
* cualitativo: Simplemente observe la presencia o ausencia del color azul.
* Cuantitativa (espectrofotometría):
* Si hay un espectrofotómetro disponible, puede medir la absorbancia de la solución azul a una longitud de onda específica (generalmente alrededor de 580-600 nm, donde el complejo azul de almidón yodo absorbe fuertemente).
* Prepare una curva de calibración utilizando concentraciones conocidas de estándares BPO y siga el mismo procedimiento para generar el color azul.
* Compare la absorbancia de su muestra con la curva de calibración para determinar la concentración de BPO en la muestra de harina original.
Consideraciones y notas importantes:
* Interferencias: Otros agentes oxidantes presentes en la harina podrían interferir potencialmente con la prueba, lo que lleva a falsos positivos.
* Sensibilidad: La sensibilidad de la prueba depende de las concentraciones de reactivos utilizados y de la eficiencia de la extracción.
* Curva de calibración: Para el análisis cuantitativo, una curva de calibración adecuada es crucial para resultados precisos. Use BPO de grado analítico para preparar sus estándares.
* Muestras de control: Es esencial ejecutar una muestra de control de harina que se sabe que está libre de BPO junto con su muestra de prueba. Esto ayuda a identificar cualquier interferencia de fondo.
* Seguridad: El éter dietílico y el éter de petróleo son inflamables. Use una campana de humo y evite las llamas abiertas.
* Validación del método: Si está utilizando este método para fines regulatorios, es esencial validar el método de acuerdo con los estándares científicos aceptados (por ejemplo, AOAC).
* Métodos alternativos: La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es un método más sofisticado y sensible para cuantificar BPO. Si se requiere cuantificación precisa, considere usar HPLC.
Resumen de pasos:
1. Extracto BPO de la harina con éter dietílico o éter de petróleo.
2. Evaporar el solvente para dejar un residuo.
3. Disolver El residuo en el ácido acético glacial.
4. reaccionar con yoduro de potasio (KI) para liberar yodo.
5. Agregar Solución de almidón.
6. Observar para color azul (cualitativo) o medir absorbancia (cuantitativa).
Debido al uso de materiales peligrosos y el potencial de interferencias, se recomienda utilizar un laboratorio para este análisis si los resultados precisos son importantes.